Pengenalan mesin PCR

mesin PCR, dikenal juga dengan instrumen amplifikasi gen PCR, instrumen amplifikasi PCR, instrumen amplifikasi asam nukleat reaksi berantai polimerase, merupakan instrumen yang mengamplifikasi DNA spesifik dengan menggunakan teknologi PCR (Polymerase chain react).Mesin PCR banyak digunakan di laboratorium medis dan biologi, misalnya untuk menentukan apakah suatu organisme uji akan memperlihatkan profil penyakit genetik. Mesin PCR banyak digunakan di laboratorium medis dan biologi, misalnya untuk menentukan apakah suatu organisme uji menunjukkan profil penyakit genetik, untuk mendiagnosis penyakit menular. penyakit, untuk mereplikasi gen, dan untuk mengidentifikasi asal usul.Apa itu mesin PCR?

Berikut daftar isinya:

l Struktur dasar mesin PCR

l Prinsip kerja mesin PCR

l Kinetika reaksi mesin PCR

Struktur dasar mesin PCR

Mesin PCR biasanya terdiri dari bagian penutup panas, bagian siklus termal, bagian transmisi, bagian kontrol, dan bagian catu daya, dll.

Prinsip kerja mesin PCR

Prinsip kerja dari mesin PCR mirip dengan proses replikasi alami DNA, yang spesifisitasnya bergantung pada primer oligonukleotida yang melengkapi kedua ujung rangkaian target, dan terdiri dari tiga langkah reaksi dasar: denaturasi-anil-ekstensi.

1. Denaturasi DNA cetakan

DNA cetakan dipanaskan hingga suhu sekitar 93°C selama waktu tertentu untuk memisahkan DNA cetakan untai ganda atau DNA untai ganda yang dibentuk oleh mesin PCR menjadi untai tunggal sehingga dapat berikatan dengan primer sebagai persiapan untuk putaran reaksi berikutnya.

2. Annealing (denaturasi) DNA cetakan dan primer

Setelah DNA cetakan didenaturasi menjadi untai tunggal dengan pemanasan, suhu diturunkan menjadi sekitar 55°C dan primer dipasangkan dan diikat ke rangkaian komplementer untai tunggal dari DNA cetakan.

3. Perpanjangan primer

Konjugat templat-primer DNA disintesis di bawah aksi TaqDNA polimerase, menggunakan dNTP sebagai bahan reaksi dan urutan target sebagai templat, untuk mensintesis untai replikasi semi-konservasi baru yang melengkapi untai DNA templat sesuai dengan prinsip basa. -replikasi berpasangan dan semi-konservasi.

Dengan mengulangi proses denaturasi-anil-ekstensi, lebih banyak “rantai replika semi-konservasi” dapat diperoleh, dan rantai baru ini dapat digunakan sebagai templat untuk siklus berikutnya.

Mesin PCR membutuhkan waktu 2~4 menit untuk menyelesaikan setiap siklus, dan seterusnya berulang kali, DNA yang dihasilkan di setiap siklus dapat menjadi templat untuk siklus berikutnya, dan setiap siklus memperkuat jumlah salinan wilayah spesifik DNA antara dua primer sintetik sebanyak 1 -lipat, dan produk mesin PCR menguatkan dengan cepat dalam bentuk eksponensial 2. Setelah 25~30 siklus (2~3 jam), mesin PCR secara teoritis dapat memperkuat gen lebih dari 109 kali lipat setelah 25~30 putaran (2~ 3 jam), dan dalam praktiknya, secara umum dapat mencapai 106~107 kali lipat.

Kinetika reaksi mesin PCR

Tiga langkah reaksi dari mesin PCR diulangi, menghasilkan peningkatan eksponensial dalam jumlah amplifikasi DNA.Amplifikasi DNA akhir dari reaksi dapat dihitung menggunakan y=(1+X) n.Y mewakili jumlah salinan fragmen DNA yang diamplifikasi, X mewakili efisiensi amplifikasi rata-rata per amplifikasi, dan n mewakili jumlah siklus.Nilai teoritis efisiensi amplifikasi rata-rata adalah 100%, tetapi pada tahap awal reaksi aktual, peningkatan fragmen DNA urutan target bersifat eksponensial, dan dengan akumulasi produk mesin PCR secara bertahap, fragmen DNA yang diamplifikasi tidak lagi meningkat. secara eksponensial, namun memasuki masa pertumbuhan linier atau periode stasioner, yaitu “efek stagnasi”, sehingga efisiensi rata-rata mesin PCR mencapai Efisiensi rata-rata mesin PCR tidak mencapai nilai teoritis.

Bioteke Perusahaan, yang berfokus pada diagnostik molekuler dan deteksi cepat, khususnya ekstraksi asam nukleat, adalah produsen profesional berteknologi tinggi dan mesin PCR.Itu diatur di Kota Wuxi, provinsi Jiangsu, Cina.Jadi, kami berharap dapat bekerja sama dengan Anda.